არაპირდაპირი ELISA მეთოდის შემუშავება ღორის მწვავე დიარეის სინდრომის კოროვირუსული IgG ანტისხეულების გამოსავლენად, რომელიც ეფუძნება რეკომბინანტულ ცილას

ღორის მწვავე დიარეის სინდრომი Coronavirus (SADS-CoV) არის ახლად აღმოჩენილი ღორის ნაწლავური პათოგენური კორონავირუსი, რომელსაც შეუძლია გამოიწვიოს წყლიანი დიარეა ახალშობილ გოჭებში და გამოიწვიოს მნიშვნელოვანი ეკონომიკური ზარალი ღორის ინდუსტრიაში.დღეისათვის, არ არსებობს SADS-CoV ინფექციის და ვაქცინის ეფექტურობის შესაფასებლად შესაფერისი სეროლოგიური მეთოდი, ამიტომ საჭიროა გადაუდებელი აუცილებლობა გამოიყენოს ეფექტური ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული ანალიზი (ELISA) ამ დეფიციტის ასანაზღაურებლად.აქ, რეკომბინანტული პლაზმიდი, რომელიც გამოხატავს SADS-CoV spike (S) ცილას, შერწყმულია ადამიანის IgG Fc დომენთან, აშენდა რეკომბინანტული ბაკულოვირუსის წარმოებისთვის და გამოხატული HEK 293F უჯრედებში.S-Fc ცილა იწმინდება პროტეინის G ფისით და ინარჩუნებს რეაქტიულობას ანტი-ადამიანის Fc და ანტი-SADS-CoV ანტისხეულებით.შემდეგ S-Fc ცილა გამოიყენეს არაპირდაპირი ELISA (S-iELISA) დასამუშავებლად და S-iELISA-ს რეაქციის პირობების ოპტიმიზაციისთვის.შედეგად, 40 SADS-CoV უარყოფითი შრატის OD450nm მნიშვნელობის ანალიზით, დადასტურებული იმუნოფლუორესცენციის ანალიზით (IFA) და Western blotting-ით, ათვლის მნიშვნელობა დადგინდა 0.3711.6 SADS-CoV დადებითი შრატის ცვალებადობის კოეფიციენტი (CV) S-iELISA-ს ფარგლებში და მათ შორის იყო 10%-ზე ნაკლები.ჯვარედინი რეაქტიულობის ტესტმა აჩვენა, რომ S-iELISA-ს არ აქვს ჯვარედინი რეაქტიულობა სხვა ღორის ვირუსის შრატებთან.გარდა ამისა, 111 კლინიკური შრატის ნიმუშის გამოვლენის საფუძველზე, IFA და S-iELISA-ს საერთო დამთხვევის მაჩვენებელი იყო 97.3%.ვირუსის ნეიტრალიზაციის ტესტმა შრატის 7 სხვადასხვა OD450nm მნიშვნელობებით აჩვენა, რომ S-iELISA-ს მიერ გამოვლენილი OD450nm მნიშვნელობა დადებითად იყო დაკავშირებული ვირუსის ნეიტრალიზაციის ტესტთან.საბოლოოდ, S-iELISA ჩატარდა ღორის ფერმის შრატის 300 ნიმუშზე.სხვა ღორის ენტეროვირუსების კომერციულმა კომპლექტებმა აჩვენა, რომ SADS-CoV, TGEV, PDCoV და PEDV IgG დადებითი მაჩვენებლები იყო შესაბამისად 81.7%, 54% და 65.3%., შესაბამისად 6%.შედეგები აჩვენებს, რომ S-iELISA არის სპეციფიკური, მგრძნობიარე და რეპროდუცირებადი და მისი გამოყენება შესაძლებელია ღორის ინდუსტრიაში SADS-CoV ინფექციის გამოსავლენად.ეს სტატია დაცულია საავტორო უფლებებით.ყველა უფლება დაცულია.


გამოქვეყნების დრო: ივნისი-22-2021